想请教一下RACE特异性引物的设计：1,3'RACE就在越靠近3'端设计.5'RACE就在越靠近5'端设计.是不是越靠两头越好?2,两者没什么关系,可以分开设计是吗?两个引物是不是都跟模板相同的?而不是设计

来源：学生作业帮助网编辑：作业帮时间：2024/04/29 15:22:42

想请教一下RACE特异性引物的设计：1,3'RACE就在越靠近3'端设计.5'RACE就在越靠近5'端设计.是不是越靠两头越好?2,两者没什么关系,可以分开设计是吗?两个引物是不是都跟模板相同的?而不是设计
想请教一下RACE特异性引物的设计：
1,3'RACE就在越靠近3'端设计.5'RACE就在越靠近5'端设计.是不是越靠两头越好?
2,两者没什么关系,可以分开设计是吗?两个引物是不是都跟模板相同的?而不是设计一对引物的时候3'端要反向互补?
3,长度就是23-28个碱基是吗?.GC 50-70 Tm 70
4,是只要设计一个就好?还是同时设计几个好?

想请教一下RACE特异性引物的设计：1,3'RACE就在越靠近3'端设计.5'RACE就在越靠近5'端设计.是不是越靠两头越好?2,两者没什么关系,可以分开设计是吗?两个引物是不是都跟模板相同的?而不是设计
1 越靠两头越好,因为靠近两头扩增的两个片段就短,将来测序的时候花钱少,但前提是你得保证引物的TM值和RACE配套引物的TM值接近,还有引物的GC含量别太离谱
2 可以分开设计,但是5‘race 我们自己设计的引物时下游引物,应和已知序列模版片段反向互补,3’race我们设计的是上游引物和已知序列模版片段相同
3 设计原则（说明书提供）：
（1）引物长度以20-28 nt为宜.
（2）引物中的GC含量一般为45%-55％,GC、AT分布均匀,应尽量避免局部富含GC或AT.
（3）引物最好不形成二级结构（发夹结构等）,与5′RACE Outer Primer和5′RACE Inner Primer不能形成复杂结构.
（4）引物3′端的3～4个碱基不要与配对引物形成互补序列.
我个人比较看重自设引物的TM值和RACE引物的TM值是否接近,GC含量别太离谱就行,其他基本不考虑
4 一般5‘Race的自设下游引物是两个,其中一条在另一条的上游相距几个碱基（自己掌握）,用于巢式PCR,就是用RACE自带的上游引物和那个你自己设计的靠下游的下游引物进行第一轮PCR,再用PCR产物做模板以RACE自带的上游引物和那个你自己设计的靠上游的下游引物进行第二轮PCR,这样扩增的结果比较可靠,如果第二轮P不出来,说明第一轮P的产物可能存在问题,即可能是失败的.如果你资金比较充足,老板比较大方,可以多设几条以防不测

不一定啊，用的是la的话，酶最多能扩5kbp多吧，最主要的还是你的引物，位置是其次

想请教一下RACE特异性引物的设计：1,3'RACE就在越靠近3'端设计.5'RACE就在越靠近5'端设计.是不是越靠两头越好?2,两者没什么关系,可以分开设计是吗?两个引物是不是都跟模板相同的?而不是设计请教:PCR中,怎样检测自己设计引物的特异性请教达人,怎样用primer5检测自己设计的引物与模板（一个含有目的基因的载体）间的特异性?请详细点,非常感谢! 序列特异性引物怎么设计就是在ssp-pcr的引物怎么样设计的原理是什么如何设计3‘和5’RACE的引物? 那个RACE设计引物具体怎么做的?求指教如何设计3‘和5’RACE的引物? 【引物设计】为什么引物太长也会降低PCR的特异性设计引物时,引物太短会降低PCR的特异性,这点好理解,但为什么引物太长也会呢?烦请各位路过的、知道的解疑, 什么是PCR引物的特异性怎么检验引物的特异性请提供一下在蛋白原核克隆、纯化和表达中所需要使用的实验技术,具体一点,如：特异性引物的设计、合成以及优化. 【求助】请教：加HIS标签的引物如何设计如何设计特异性引物我没学过分子方面的理论知识,但是现在我想做一个真菌的分子检测,就想设计一对引物进行特异性检测.要与其他不同的参考菌株做检测,那是不是在我使用软件设计引物的现在在做5,RACE.扩增出目的条带后胶回收,然后用特异性引物去嵌套验证,结果也有目的大小的条带扩增出来回收的片段1K左右怎样用用NCBI验证引物的特异性 primer 与BLAST 设计引物哪个好?设计引物遇到点问题,用primer 设计的引物,特异性不好.而用BLAST设计的引物又无法了解引物的一些特性.哪个更好呢?不知道用primer可不可以检测BLAST设计的引物的特 PCR引物设计不好,如何提高引物特异性?设计的PCR引物都是80多分的样子,但是一旦加上酶切位点和保护碱基以后,引物的特异性就变得特别差,如何解决这种问题,有没有什么设计引物的技巧呢? 如何设计随机引物我是想克隆一段已经转入水稻基因组的外源基因。打算设计一对引物其5‘端使用随机引物，中间用特异性内切酶序列，3’端使用已知目的基因两端序列。（因为完全使有没有高手会设计引物呢,帮帮忙,急用引物,方便的留下邮箱帮忙设计一下,谢谢谢谢!